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Ni-NTA蛋白纯化树脂 试剂是一种亲和层析基质,用于纯化携带His标签的重组蛋白。
His标签中的组氨酸残基以高特异性和亲和性结合到固定镍离子配位球的空位上。
清除的细胞裂解物被装载到基质上。他标记的蛋白质结合在一起,其他蛋白质穿过基质。
洗涤后,his标记的蛋白质在天然或变性条件下在缓冲液中洗脱
QIAexpress Ni-NTA蛋白纯化系统是基于Ni-NTA(镍-硝基三乙酸)树脂
对含有6个或更多组氨酸残基(连续或交替)亲和标签- His标签的蛋白质的显著选择性。
该技术允许在原生或变性条件下从任何表达系统中一步纯化几乎任何his标记的蛋白质。
NTA对镍离子有四个螯合位点,与金属螯合净化系统相比,它能更紧密地结合镍,
而金属螯合净化系统只有三个位点可与金属离子相互作用。
额外的螯合位点防止镍离子浸出,并导致更大的结合能力和更高纯度的蛋白质制备,
比使用其他金属螯合纯化系统获得的。QIAexpress系统可用于从任何表达系统中纯化his标记蛋白,
包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌 his标记蛋白的纯化包括4个阶段:
细胞裂解、结合、洗涤和洗脱(见用Ni-NTA蛋白纯化系统纯化蛋白质)。
使用QIAexpress系统纯化重组蛋白不依赖于蛋白质的三维结构或6xHis标签。
这允许一步蛋白质纯化在原生或变性条件下,从稀溶液和粗裂解物。
强变性剂和清洁剂可用于有效的增溶和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体的蛋白质。
能够有效去除非特异性结合污染物的试剂可以包括在洗涤缓冲液中(见表)。
通过加入100-250 mM咪唑作为竞争对手或降低pH值,在温和条件下洗脱纯化的蛋白质
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